Isi
Kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) adalah alat yang digunakan untuk memisahkan zat dari suatu campuran. Pemisahan dan identifikasi bahan kimia tertentu terjadi terutama di kolom kromatografi sistem. Banyak tipe kolom tersedia untuk CLAE, dan masing-masing digunakan untuk tipe analisis tertentu. Kolom C18 adalah nonpolar terkuat yang umumnya digunakan. Setelah penggunaan terus menerus untuk jangka waktu yang lama, laju aliran pelarut yang melewatinya menurun dan waktu analisis meningkat. Penyebab lain dari penurunan waktu analisis adalah memiliki sampel yang meninggalkan sejumlah kecil bahan kimia dalam material kolom, sehingga mengurangi kemampuan untuk memisahkannya. Pemulihan permukaannya dapat dilakukan dengan mengolah bahan dengan serangkaian pelarut khusus untuk membersihkannya dari sampel yang tersisa dan merevitalisasi bahan pendukung.
Langkah 1
Hapus kolom C18 dari arah aliran dan letakkan di arah yang berlawanan. Mendapatkan kembali pelarutnya akan mengurangi efek akumulasi yang terjadi seiring waktu. Perhatian harus diberikan untuk tidak meninggalkan terlalu banyak material yang terkumpul di ujung kolom. Beberapa pabrik menggunakan mata jaring yang lebih besar di bagian atas sehingga saat aliran berubah arah, mata jaring berada pada posisi di bawah. Metode pemulihan ini disebut pembalikan aliran. Untuk mencegah penumpukan mengalir ke detektor sistem dan mungkin menyebabkan gangguan, biarkan berfungsi tanpa detektor terhubung dan mengarahkan aliran dari kolom ke pembuangan.
Langkah 2
Tempatkan tabung bagian pelarut dalam serangkaian pelarut untuk mengelusi senyawa apa pun yang tertahan di kolom ke arah yang berlawanan. Pelarut ini bervariasi dalam karakteristik hidrofiliknya. Dengan memvariasikannya, Anda akan mengelusi senyawa yang memiliki sifat hidrofilik yang sama beragamnya. Gunakan 50 ml setiap pelarut berikut secara berurutan: air (jika Anda menggunakan buffer), metanol, isopropanol, diklorometana, heksana, diklorometana, dan isopropanol.
LANGKAH 3
Gantilah kolom ke arah yang benar dan buat pelarut Anda mengalir melaluinya. Gunakan setidaknya 75 ml untuk mencucinya sebelum melanjutkan. Ujilah dengan pola yang Anda gunakan ketika masih baru dan periksa hasilnya. Perhatikan saat mencapai titik retensi maksimum dan total waktu analisis. Sejauh mana atribut ini cocok dengan pengujian awal ketika masih baru akan menunjukkan sejauh mana kolom tersebut dipulihkan. Jika hasilnya tidak memuaskan, ganti kolom dengan yang baru dan buang yang lama.
