Isi

• Instruksi
• Memulihkan kolom
• Bagaimana
• Perhatikan
• Apa yang kamu butuhkan

High Performance Liquid Chromatography (HPLC) adalah metode umum analisis laboratorium di mana sampel dipisahkan menjadi komponen kimianya ketika melewati kolom. Kolom ini diisi dengan bahan berpori, biasanya silika gel. Kolom fase terbalik standar, seperti C8, terkadang dapat menyumbat atau terkontaminasi. Kolom ini dapat diambil dengan menggunakan teknik yang sangat sederhana.

Instruksi

Pelarut yang tepat dapat memulihkan kolom yang kotor (Jupiterimages / liquidlibrary / Getty Images)

Memulihkan kolom

1. Lepaskan kolom dan balikkan posisinya, sehingga fase seluler sekarang memasuki apa yang biasanya merupakan keluaran kolom. Pasang outlet ke ujung kolom yang lain (yang merupakan entri asli), dan biarkan mengalir ke pembuangan.

2. Pompa serangkaian pelarut agar polaritasnya berkurang. Serangkaian dasar yang direkomendasikan adalah mulai dengan metanol, kemudian beralih ke asetonitril, kemudian asetonitril / isopropanol (75:25), isopropanol, metilen klorida, dan heksana. Jika fase gerak yang ada di kolom itu adalah absorben, direkomendasikan suatu bagian dengan air sebelum dalam metanol. Aliran satu hingga dua mililiter per menit sudah cukup, dan sekitar sepuluh kolom volume dari setiap pelarut harus dipompa. Kolom volume adalah ruang bagian dalam kolom, dan dihitung dengan (0,7 x pi x (DI / 2) ^ 2 x L), di mana DI adalah diameter bagian dalam kolom dan L adalah panjangnya.

   
   

3. Pompa sepuluh volume isopropanol melalui kolom untuk mempersiapkannya untuk digunakan dengan fase gerak asli. Jika fase gerak asli telah empuk, juga pompa air melalui kolom setelah isopropanol, sebelum kembali ke fase gerak asli.

4. Lepaskan kolom, balikkan, dan putar lagi sehingga berada di posisi semula (sehingga fase yang dapat bergerak memasuki sisi kanan kolom). Sambungkan kembali output speaker ke detektor.

Bagaimana

• Jika proses ini tidak benar-benar membersihkan kolom, campuran 50:50 dimetil sulfoksida (DMSO) dan dimetil formamida (DMF) dapat digunakan. Residu protein dan ion logam mungkin memerlukan jenis pelarut lain, seperti reagen hemat ion atau larutan etilen diamina tetra-asetat asam (EDTA).

Perhatikan

• Pada beberapa peralatan, tulang belakang akan memiliki saringan logam kasar sebagai saluran masuk. Dalam hal ini, mengembalikan kolom akan memungkinkan fase diam untuk meninggalkan kolom, dan ini tidak dianjurkan. Hubungi dealer Anda jika Anda tidak yakin.
• Pelarut yang digunakan dalam proses ini berpotensi toksik ketika tertelan dan terhirup. Gunakan tindakan pencegahan laboratorium normal saat menangani.

Apa yang kamu butuhkan

• Perangkat HPLC
• Air
• Metanol
• Asetonitril
• Isopropanol
• Metilen klorida
• Hexane